微生物限度檢查法的供試液制備方法有哪些

     微生物限度檢查法必須用到供試液，那么如何制備供試液呢？可根據(jù)供試品的理化特性與生物學(xué)特性，采取適宜的方法制備供試液，常用的供試液制備方法如下：
    一、液體供試品
      取供試品10ml，加PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，混勻，作為1：10的供試液。油劑可加入適量的無菌聚山梨酯80使供試品分散均勻。水溶性液體制劑也可用混合的供試品原液作為供試液。

    二、固體、半固體或黏稠性供試品 
       取供試品10g，加PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，用勻漿儀或其他適宜的方法，混勻，作為1：10的供試液。必要時(shí)加適量的無菌聚山梨酯80，并置水浴中適當(dāng)加溫使供試品分散均勻。

    三、需用特殊供試液制備方法的供試品
     1、非水溶性供試品
       方法1：取供試品5g(5ml),加入含溶化的（溫度不超過45℃）5g司盤80、3g單硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80無菌混合物的燒杯中，用無菌玻棒攪拌成團(tuán)后，慢慢加入45℃左右的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，邊加邊攪拌，使供試品充分乳化，作為1:20的供試液。
       方法2：取供試品10g，加至含20ml無菌十四烷酸異丙酯（制法見附錄XIII B無菌檢查法中供試品的無菌檢查項(xiàng)下）和無菌玻璃珠的適宜容器中 ，必要時(shí)可增加十四烷酸異丙酯的用量，充分振搖，使供試品溶解。然后加入45℃的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml，振搖5~10分鐘，萃取，靜置使油水明顯分層，取其水層作為1：10的供試液。
     2、膜劑供試品
      取供試品100cm2，剪碎，加50ml或100ml的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液（必要時(shí)可增加稀釋液），浸泡，振搖，作為1：10或1：20的供試液。
     3、腸溶及結(jié)腸溶制劑供試品
      取供試品10g ，加pH6.8無菌磷酸鹽緩沖液(用于腸溶制劑)PH7.6無菌磷酸鹽緩沖液（用于結(jié)腸溶制劑）至100ml，置45℃水浴中，振搖，使溶解，作為1：10的供試液。
     4、氣霧劑、噴霧劑供試品
      取規(guī)定量供試品，置冰凍室冷凍約1小時(shí)，取出，迅速消毒供試品開啟部位，用無菌鋼錐在該部位鉆一小孔，放至室溫，并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)容器，使拋射劑緩緩全部釋出。用無菌注射器吸出全部藥液，加至適量的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液（若含非水溶性成分，加適量的無菌聚山梨酯80）中，混勻，取相當(dāng)于10g或10ml的供試品，再稀釋成1：10的供試液。
     5、具抑菌活性的供試品
      當(dāng)供試品有抑菌活性時(shí)，應(yīng)消除供試液的抑菌活性后，再依法檢查。
     （1）培養(yǎng)基稀釋法：取規(guī)定量的供試液，至較大量的培養(yǎng)基中，使單位體積內(nèi)的供試品含量減少，至不含抑菌作用。測定細(xì)菌、霉菌及酵母菌的菌數(shù)時(shí)，取同稀釋級的供試液2ml，每1ml供試液可等量分注多個(gè)平皿，傾注瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。每1ml供試液所注的平皿中生長的菌數(shù)之和即為1ml的菌落數(shù)，計(jì)算每1ml供試液的平均菌落數(shù)，按平皿法計(jì)數(shù)規(guī)則報(bào)告菌數(shù)；控制菌檢查時(shí)，可加大增菌培養(yǎng)基的用量。
     （2）離心沉淀集菌法：取一定量的供試液，3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘（供試液如有沉淀，先以500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，取全部上清液再離心），棄去上清液，留底部集菌液約2ml，加稀釋液補(bǔ)至原量。
     （3）薄膜過濾法：見細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)項(xiàng)下的“薄膜過濾法”。
     （4）中和法：凡含汞、砷或防腐劑等具有抑菌作用的供試品，可用適宜的中和劑或滅活劑消除其抑菌成分。中和劑或滅活劑可加在所用的稀釋液或培養(yǎng)基中。